느타리버섯균의 액체배양에서 잡균 검색 및 활력 검정배지

 잡균검색 및 활력검정 배지

액체종균 생산을 위한 균사체 액체배양 실험에서 발생하는 오염원의 검사를 위하여 Table 5 및 Table 6의 배지조성을 갖는 배지를 조제하여 사용하였다. 액체배양에서 발생하는 세균오염의 판별을 위하여 수분활성이 높고 자화가 용이한 질소원과 영양분이 풍부한 YMA배지를 세균 오염에 대한 검출배지로 사용하였으며, 사상균의 오염을 판별하기 위해서는 수분활성이 낮고 자화할 수 있는 영양분이 부족한 톱밥배지에서 배양하는 것이 한천평판 배지에서 배양하는 것 보다 단기간 배양에 의하여 오염판별을 용이하게 할 수 있었다.

또한 액체 배양된 느타리버섯 균사체의 활력측정을 위하여 Table 6의 톱밥배지를 페트리디쉬에 약 3㎜의 두께로 첨가한 후 121℃, 15psi에서 30분 동안 살균하여, 액체배양된 느타리버섯균의 균사현탁액 1㎖를 접종하여 25℃에서 배양하여 균사의 활력을 조사하였다.

 

Table 5. Composition of the check medium for bacterial contamination.

Ingredient	Concentration(g/L)
Malt extract Yeast extract Peptone Dextrose Agar	3 3 5 10 20

 

Table 6. Composition of checking medium for fungal contamination

Ingredient	Concentration(%,v/v)
Hardwood sawdust Rice bran Water content	80.0 20.0 65.0

 

세균 및 사상균과 같은 오염원의 검색을 위하여 배양병의 접종구(또는 균사체 현탁액 배출구)에 연결된 연결관(aseptic or quick connector)을 분리하여 YMA 평판배지에 배양액을 약 5㎖ 정도 취한 다음 페트리디쉬의 뚜껑을 약간 열어서 틈을 만들어 기울어지게 하여 배지표면의 유리수를 제거한다. 그런 다음 배양액이 접종된 평판배지에서 육안으로 식별이 가능한 균사체(펠렛)를 백금선으로 취하여 활엽수 톱밥배지가 첨가된 시험관에 접종한다. 검색하고자 하는 배양액이 접종된 시험관과 페트리디쉬를 각각 25℃와 30℃의 항온기에서 배양하여 잡균의 존재 유무를 판별한다. 특히 불완전균의 무성포자를 짧은 기간에 유도하기 위해서는 광조사 하에서 배양하였다.