한국의 동충하초 동충하초균의 연구 방법 2. 동충하초의 배양 (3) 동충하초균의 분리

한국의 동충하초 동충하초균의 연구 방법 2. 동충하초의 배양 (3) 동충하초균의 분리

 

2021년 06월 22일. 오늘도 우리 남은 인생의 첫날을 맞이하는 화요일로 오늘도 성재모동충하초를 잘 재배하기 위하여 보살피는 시간을 가지면서 언제나 고객님에게 고마운 마음을 드리며 바르고 천천히 흔들림이 없이 그냥 가면서 이렇게 글을 올리는 것만으로도 기적이고 축복으로 알고 걸림이 없는 하루를 보내려고 한다. 오늘 또 하루를 선물로 받았네요.

 

한국의 동충하초 동충하초균의 연구 방법 2. 동충하초의 배양 (3) 동충하초균의 분리에 대한 원고를 작성하다 보니 생각나는 것이 참 많다. 동충하초를 채집하면 동충하초에 붙어있는 흙을 깨끗이 물로 제거한 후 분리 작업을 시작한다. 많이 채집하는 날이면 저녁 늦게까지 물배지 위에 동충하초를 고정하는 작업을 하고 아침에 일찍 일어나서 채집가기 전에 물배지 위에 떨어진 자낭포자를 감자한천배지에 이식시키고 채집하기 위하여 간다.

채집하는 동안에는 동충하초로부터 균주를 얻기 위하여 균 분리하는 작업을 반복한다. 아무리 좋은 장소에 간다고 하여도 관광을 할 시간적인 여유가 없다. 이렇게 하여 수집된 균주들은 실험실에 와서 자실체를 형성시키어 산업화에 이용할 수 있는지를 본다. 그렇게 하여 산업화시킨 것이 성재모동충하초이고 이것을 현미에 대량 배양하여 지금 인류건강길잡이가 된 동충하초이다. 동충하초로부터 균주를 얻는 것은 동충하초를 산업화시키는 데 가장 중요한 일이라고 본다.

 

오늘은 동충하초를 포자에서 분리하는 사진을 올려놓고 서두르지 않고 즐겁게 내가 하는 일에 바르고 천천히 흔들림이 없이 그냥 가려고 한다. 우리 모두 사는 동안 최선을 다해 후회 없는 삶을 살았으면 좋겠습니다. 그저 물처럼 흐르는 인생으로 늘 행복하고 웃음 가득 찬 나날이 되기를 기원합시다. 더욱 건강하시고, 범사가 잘 되는 복을 누리시기를 기원합니다. 고맙고 고맙습니다.

 

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II. 한국의 동충하초. 동충하초균의 연구 방법 2. 동충하초의 배양 (3) 동충하초의 분리배양 방법

 

(3) 동충하초의 분리하는 방법

채집된 동충하초균의 분리는 조직체보다는 포자로부터 하는 것이 좋다. 자실체를 형성하는 종의 경우는 자실체를 물한천배지(water agar)가 들어 있는 샬레(Schale)의 뚜껑에 테이프로 고정한 후 뚜껑을 덮어 자실체로부터 자낭포자가 배지 위에 떨어지게 한다. 물한천배지 위에서 발아한 자낭포자를 현미경 하에서 감자한천배지(PDA)에 옮겨 분리한다. 자실체를 형성하지 않는 균의 경우는 곤충의 몸 위에 분생포자를 형성하는데 이런 경우는 살균된 백금바늘로 분생포자를 직접 떼어 내어 역시 감자한천배지에 이식하여 분리한다. 동충하초의 조직에서 균을 분리할 때는 세균의 오염에 특히 조심하여야 하는데, 세균의 오염을 방지하기 위해서는 자실체의 작은 조각을 하이포아염소산나트륨(sodium hypochloride)에 1분간 살균한다. 살균된 조직은 멸균된 여과지에서 습기를 제거한 후 물한천배지 위에 놓고 20℃ 항온실에 2일간 배양한 다음, 조직으로부터 생장한 균사를 감자한천배지에 옮겨 분리한다.

 

(3) Isolation of cultures

Cultures of entomopathogenic fungi are isolated using ascospores, conidia or hyphae. Spores are generally preferred as the inoculum over fungal tissues for most attempts to isolate cultures. When using ascospores as inoculum, the stroma should be affixed to the lid of a petri dish by cellophane tape (Fig. II-3) and then placed over water agar. Ascospores are forcibly discharged from the fresh stroma and fall onto the surface of the agar. Once the spores germinate (hyphal growth away from the ascospores is usually quite obvious with a stereo microscope and illumination through the bottom of the plate), small blocks of the growing fungus can be transferred to a nutrient medium such as potato dextrose agar (PDA). For fungi that produce conidia, one or more conidia are transferred with a sterile needle directly to PDA or another nutrient medium. When fungal tissues are used to attempt a culture isolation, bacterial or fungal contamination is a continuous concern. In this case, a piece of tissue ca. 2-3 mm on each side from a fruiting body is disinfected by immersing it in commercial bleach (4-5% NaOCl) for a minute, washed in sterile water, and then placed on dry sterilized filter paper to absorb the excess liquid. The surface-sterilized tissue is then placed on water agar and cultured for 2 days at 20°C. Hyphal tips growing away from the inoculum can then be transferred onto a nutrient medium.