한국의 동충하초 동충하초균의 연구 방법 2. 동충하초의 배양 (6) 균주의 대량 배양법 3) 접종원 배양을 위한 삼각플라스크 배양

한국의 동충하초 동충하초균의 연구 방법 2. 동충하초의 배양 (6) 균주의 대량 배양법 3) 접종원 배양을 위한 삼각플라스크 배양

 

2021년 07월 09일. 오늘도 우리 남은 인생의 첫날을 맞이하는 구름 사이로 별을 볼 수 있는 주말인 금요일로 이제는 완연한 여름 날씨로 오늘도 성재모동충하초를 잘 재배하기 위하여 보살피는 시간을 가지면서 언제나 고객님에게 고마운 마음을 드리며 바르고 천천히 흔들림이 없이 그냥 가면서 이렇게 글을 올리는 것만으로 기적이고 축복으로 알고 걸림이 없는 하루를 보내려고 한다. 오늘 또 하루를 선물로 받았네요.

 

한국의 동충하초 동충하초균의 연구 방법 2. 동충하초의 배양 (6) 균주의 대량 배양법 3) 접종원 배양을 위한 삼각플라스크 배양. 평판 배양을 통하여 재배할 동충하초 균에 대한 정보를 얻었으니 지금부터는 대량으로 배양하는 방법으로 균을 증식시키어야 한다. 증식하는 방법으로는 액체 배양으로 만드는 방법을 평판 배양과 같은데 배지를 굳게 하는 한천배지를 넣지 않은 것으로 액체에서 균을 배양하는 것이다. 영양분만 있으면 액체에서도 잘 잘라 진탕기를 가지고 흔들어 주어야 한다. 동충하초의 종류에 따르지만 지금 재배하고 있는 번데기동충하초는 일주일이면 잘 자라 원하는 배지에 접종하여 자실체의 형성을 시킬 수 있다.

 

오늘은 삼각 플라스크 안에서 자라고 있는 균사 덩이의 사진을 울려놓고 서두르지 않고 즐겁게 내가 하는 일에 바르고 천천히 흔들림이 없이 그냥 가려고 한다. 우리 모두 사는 동안 최선을 다해 후회 없는 삶을 살았으면 좋겠습니다. 그저 물처럼 흐르는 인생으로 늘 행복하고 웃음 가득 찬 나날이 되기를 기원합시다. 더욱 건강하시고, 범사가 잘 되는 복을 누리시기를 기원합니다. 고맙고 고맙습니다.

 

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II. 한국의 동충하초 동충하초균의 연구 방법 2. 동충하초의 배양 (6) 균주의 대량 배양법 3) 접종원 배양을 위한 삼각플라스크 배양

 

3) 접종원 배양을 위한 삼각플라스크 배양

평판 배양기의 균사체가 평판면적의 약 70% 정도 자랐을 때 균사체의 끝부분을 지름 6㎜의 코르크 보러 또는 백금구로 3～5개의 균사체 조각을 삼각플라스크에 접종한다. 접종되는 균사체 조각의 숫자가 증가함에 따라서 접종원의 배양일 수가 단축될 수 있으나 적당한 균사체를 접종하는 것이 더 유리한다. 그리고 접종되는 균사의 밀도가 높을수록 형성되는 균사구(펠렛)의 지름이 더 작아지게 되므로 적당량을 접종하여 알맞은 크기의 균사구로 증식하도록 유도한다. 접종된 삼각플라스크는 회전진탕배양기 또는 왕복진탕배양기에서 80～120rpm 정도의 회전수와 각 품종의 균사 배양온도를 맞춘 후 진탕배양 하게 된다. 진탕배양에서는 물의 회전 때문에 균사체가 서로 끊어지는 동시에 균사구의 크기 및 균사구 내의 균사 밀도를 좌우하게 된다. 따라서 적당한 회전수로 배양하는 것이 균사의 물리적인 스트레스를 줄이는 방법이 될 수 있다.

균사체를 액체 배양하는 배지 성분과 시험관이나 평판 배양에 사용하는 차이점은 배지에 응고제인 한천의 첨가 여부에 있다. 액체 배양에 적합한 배지 성분은 각 버섯균의 균사 생장에 알맞은 액체배지의 선발을 통해 배지 성분으로 사용하게 된다. 배지 성분으로는 탄소원, 질소원, 유․ 무기염류, 미량원소 등이 첨가된다. 일반적으로 탄소원은 질소원의 약 10배 정도의 비율로 첨가하게 된다.

삼각플라스크 배양은 배양액을 흔들어서 배양하게 되므로 삼각플라스크에 넣는 배양액체량의 2배 이상이 되는 용량의 삼각플라스크를 사용하게 된다. 즉 100㎖의 배양액체량을 배양하기 위해서는 200㎖ 이상 크기의 삼각플라스크를 사용한다. 준비된 삼각플라스크에 배지 성분을 넣고 멸균수를 첨가하여 배지 성분이 완전히 용해되도록 끓인 다음 삼각플라스크의 입구를 솜마개나 플라스틱 또는 실리콘 마개를 한 후 포일로 마개를 덮고 121℃, 15psi(1.1㎏/㎠)의 고압살균기로 20분간 살균한다.

삼각플라스크 배양은 회전식 진탕배양 기에 고정한 다음 120rpm 정도의 회전수 및 동충하초균 균의 균사체의 적합한 온도를 설정한 후 진탕배양에 들어간다. 일반적으로 25±1℃에서 7～10일간 배양하게 되면 균사구가 형성된다.

 

3) Flask Cultivation for Inoculum

When the collection of spawn cover the 70% of transplanted area, you transplant 3-5 slips of spawn to tripod flask using 6㎜ cork borer or needle. It is possible to say that the more the number of transplanting slip, the less the time takes which is needed for cultivation. But the decent number of slips are recommendable. The higher the density of transplanted spawn, the smaller the size of pellet. So it is reasonable to choose decent sized pellet and proliferate it.

After this, you put the transplanted flask to rotary shaking incubator or round shaking incubator and set the cultivator's turn-over rate as 80-120rpm, and proper cultivation temperature.

In shaking incubator, water's turning-over not only breaks fungi's linkage but also influences the density and the size of spawn. According to this, proper turn-over rate could be the way to minimize the pressure which spawn take on. The difference between agar composition, which is needed in fluid cultivation, and test tube or flat area cultivation is whether there is dextrose or not in each agar. The proper agar composition for fluid cultivation, which is selected to help spawn's healthy growing, is used.

Agar composition includes carbon, nitrogen, organic, non-organic base and microelement. In general, carbon is added 10 times more than nitrogen.

The capacity of flask should be two times as large as the amount of cultivation fluid, that is, 200ml flask is needed to cultivate 100ml fluid. You just put agar composition with distilled water and then boil it until the agar composition is completely dissolved.

After this, put the cotton, plastic or silicon lid to on the top of flask, seal it up with foil and sterilize it for 20 minutes under 121℃, 15psi condition. The process of tripod flask cultivating is as follows. At first, set the appropriate temperature for spawn and turning-over rate as 120rpm, then start shaking incubator. Generally, after 7-10 days of cultivating process under the 25± 1℃, small round mycelia are starting to form.