한국의 동충하초 동충하초균의 연구 방법 2. 동충하초의 배양 (6) 균주의 대량 배양법 2) 원균의 확대 배양을 위한 평판 배양
2021년 07월 05일. 오늘도 우리 남은 인생의 첫날을 맞이하는 비가 오는 월요일로 이제는 완연한 여름 날씨로 오늘도 성재모동충하초를 잘 재배하기 위하여 보살피는 시간을 가지면서 언제나 고객님에게 고마운 마음을 드리며 바르고 천천히 흔들림이 없이 그냥 가면서 이렇게 글을 올리는 것만으로 기적이고 축복으로 알고 걸림이 없는 하루를 보내려고 한다. 오늘 또 하루를 선물로 받았네요.
한국의 동충하초 동충하초균의 연구 방법 2. 동충하초의 배양 (6) 균주의 대량 배양법 1) 원균의 확대 배양을 위한 평판 배양이다. 동충하초를 재배하려면 보관된 시험관에서 평판 배양을 위하여 페트리디쉬에 균을 이식할 수 있도록 배지를 만들어 내야 한다. 배지 만드는 방법을 상세하게 기술을 하였으니 그 방법대로 하면 된다고 본다. 무엇이든지 잘하려면 하는 일에 익숙하게 되도록 연습하여 몸에 배도록 숙달하게 되어야 한다. 숙달하여지면 대부분 자기 나름대로 빨리하려고 하는데 균을 다룰 때는 언제나 원칙을 중요시하여 원칙대로 하면 잘 배양을 할 수 있다. 균을 알게 된 것은 1963년이니까 벌써 50년이 넘었다. 그런데도 원칙을 지키면 잘 되고 원칙을 지키지 않으면 오염이 되는 실수를 하게 된다. 그래서 언제나 바르고 천천히 흔들림이 없이 그냥 가는 것이 철칙이라고 본다.
오늘은 페트리디쉬에서 균사가 자라는 사진을 울려놓고 서두르지 않고 즐겁게 내가 하는 일에 바르고 천천히 흔들림이 없이 그냥 가려고 한다. 우리 모두 사는 동안 최선을 다해 후회 없는 삶을 살았으면 좋겠습니다. 그저 물처럼 흐르는 인생으로 늘 행복하고 웃음 가득 찬 나날이 되기를 기원합시다. 더욱 건강하시고, 범사가 잘 되는 복을 누리시기를 기원합니다. 고맙고 고맙습니다.
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II. 한국의 동충하초 동충하초균의 연구 방법 2. 동충하초의 배양 (6) 균주의 대량 배양법 2) 원균의 확대 배양을 위한 평판 배양
2) 원균의 확대 배양을 위한 평판 배양
이식하는 방법은 무균실이나 무균상에서 원균이 들어있는 배지의 시험관 입구를 화염살균을 하고 백금선으로 원균을 사방 5～7㎜, 두께 1～2㎜의 크기로 배지와 함께 떼어 내어 평판 배양기의 중앙에 접종한다. 이 작업은 반드시 세균이나 다른 균으로부터 배양하려는 동충하초균을 완전히 차단해야 한다. 접종이 끝난 평판 배양기를 25℃ 항온기에 넣어 활력 있고 빠른 균사 생장이 되도록 한다. 평판 내 균사가 약 70% 정도 자랐을 때 액체배지가 분 주된 삼각플라스크에 접종하여 균사체의 액체배양을 한다.
평판배지의 조제는 배지를 녹일 수 있는 큰 삼각플라스크에 배지 성분을 증류수에 녹인 후 한천을 첨가하여 한천이 녹아서 투명해질 때까지 녹인다. 배지 성분이 완전히 용해되면 삼각플라스크의 입구를 솜마개로 막고 알루미늄 포일로 플라스크 입구를 완전히 덮는다. 이렇게 하면 살균할 때 솜마개가 젖게 되는 것을 방지할 수 있다. 배지가 조제된 삼각플라스크를 고압살균기에 넣고 121℃, 15psi(1.1㎏/㎠)에서 20분간 살균한다.
살균이 끝난 배지가 45℃까지 식으면 미리 살균된 페트리디쉬에 분주하게 된다. 일반적으로 페트리디쉬의 지름이 8.5～11㎝의 것을 사용하면 15～20㎖씩 배지를 분주하고, 무균상 내에서 약 2시간 방치하면 배지가 굳어진다. 여기에 원균인 동충하초균을 이식하여 균주를 증식한다(사진 34).
배양실은 23～30℃까지 임의로 온도 조절이 가능하도록 항온장치 및 에어컨을 설치하고, 습도는 70% 이하로 조절한다. 배양실은 동충하초균의 종류별 배양퇴적온도인 25～30℃가 유지되도록 하고, 외부온도의 영향을 줄이기 위하여 단열이 잘된 곳을 사용한다.
2) Petri Plates Cultivation for Enlargement Cultivation for original isolate
The transplanting methods are, firstly sterilizing on the top of tube and dividing the source fungi into smaller by 5-7㎜ length, 1-2㎜ thick, then transplanting it on the center of flat cultivation equipment. This process needs perfect isolation of Cordyceps fungi from other germs. After this, you put the flat cultivation equipment to incubator (25℃) to help healthy and prompt growth. When 70% of fungi are grown in flat equipment, transplant it to tripod flask for fluid cultivation.
After agar element is dissolved, seal up the flask and recover it airtight with aluminum foil. This procedure prevents cotton lid from soaking. The next procedure is putting the agared tripod flask to the high-pressure sterilizer and sterilize it under the condition of 121℃, 15psi for 20 minutes. When agar cools off, it should be distributed to petri dish. If you use 8.5-11cm petri dish, distribute agar with 15-20ml each, and leave it under the bacteria-free case for 2 hours then you can have frozen agar.
Cultivating room should have apyrostate and air conditioner to maintain steady 23-30℃ temperature. Humidity should be below 70%, and 23-30℃ is the optimum temperature for Cordyceps's cultivation. Heat-proof places are recommended to minimize heat influences.
