20210703 한국의 동충하초 동충하초균의 연구 방법 2. 동충하초의 배양 (6) 균주의 대량 배양법 1) 원균의 배양
2021년 07월 03일. 오늘도 우리 남은 인생의 첫날을 맞이하는 비가 오는 토요일로 이제는 완연한 여름 날씨로 오늘도 성재모동충하초를 잘 재배하기 위하여 보살피는 시간을 가지면서 언제나 고객님에게 고마운 마음을 드리며 바르고 천천히 흔들림이 없이 그냥 가면서 이렇게 글을 올리는 것만으로도 기적이고 축복으로 알고 걸림이 없는 하루를 보내려고 한다. 오늘 또 하루를 선물로 받았네요.
한국의 동충하초 동충하초균의 연구 방법 2. 동충하초의 배양 (6) 균주의 대량 배양법 1) 원균 배양이다. 균주의 대량 배양을 위하여서는 원균의 배양, 원균의 확대 배양을 위한 평판 배양, 접종원 배양을 위한 삼각플라스크 배양, 액체종균의 배양과 현미를 이용한 종균배양이 있다. 이 단계는 동충하초 생산을 위한 가장 기초적인 것으로 오늘은 원균 배양하는 방법을 올리기로 하였다. 동충하초를 재배하려면 모든 과정이 살균이라는 단계를 거치어야 하므로 시작하려면 경비도 많이 들고 많은 기술을 가지어야 하므로 경비와 기술이 요구된다.
오늘은 시험관과 싸레와 삼각푸라스크에서 잘 자라는 사진을 울려놓고 서두르지 않고 즐겁게 내가 하는 일에 바르고 천천히 흔들림이 없이 그냥 가려고 한다. 우리 모두 사는 동안 최선을 다해 후회 없는 삶을 살았으면 좋겠습니다. 그저 물처럼 흐르는 인생으로 늘 행복하고 웃음 가득 찬 나날이 되기를 기원합시다. 더욱 건강하시고, 범사가 잘 되는 복을 누리시기를 기원합니다. 고맙고 고맙습니다.
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II. 한국의 동충하초 동충하초균의 연구 방법 2. 동충하초의 배양 (6) 균주의 대량 배양법 1) 원균의 배양
(1) 원균의 배양
강원대학교 동충하초은행에서는 균사체의 활력 및 형질을 안전하게 유지하기 위해서 보관 균주를 3～6개월마다 계대 배양하여 4～10℃ 정도의 저온에서 보관하고 있으며, 원균의 확대 배양은 평판(petri-dish)배지에서 이루어지고 있다.
원균의 보존 및 배양에 사용되는 시험관은 10～25㎜×75～200㎜가 있으므로 배양목적에 맞게 선택하여 사용할 수 있으나, 버섯균의 보존 및 증식을 위해서는 18×180㎜의 시험관을 주로 사용한다. 시험관 마개는 잡균의 오염을 방지하고 공기가 통하여 균사가 죽지 않고 생육할 수 있도록 하는 기능을 하는데 솜마개를 만들어 사용하기도 하나 시간과 노력이 많이 소요되므로 실리콘 마개나 스크류캡 시험관을 사용한다.
원균을 증식하고 보존하는 데에는 감자한천배지(Potato Dextrose Agar), 엿효모배지(Malt Yeast Agar), SDAY(Sabouraud dextrose agar)를 영양배지로 사용한다. 시험관 배양기의 조제는 한천이 첨가된 배지가 완전히 녹은 것을 시험관 길이의 1/4 정도 넣어준다. 이때 입구에 배지가 묻으면 마개를 통하여 잡균이 오염될 수 있으므로 깔때기에 작은 유리 대롱을 연결하여 조심스럽게 분주하다. 배지를 넣은 시험관은 솜마개를 하고 시험관망에 넣어 고압살균기에서 충분한 배기를 하면서 121℃, 15psi(1.1㎏/㎠) 압력으로 20분간 살균한다. 살균작업이 완전히 끝나면 압력이 자연적으로 내려가도록 한 후 시험관을 꺼내어 비스듬히 놓는다. 시험관을 비스듬히 놓는 이유는 동충하초균을 배양할 때 표면적이 적으면 물에 균사가 닿아 세균에 의하여 오염이 될 수도 있고 호기성균인 관계로 배지 표면에서 실과 같은 균사체를 형성하여 생장해 나가므로 표면적 증대를 위한 것이다. 사면요령은 배지의 한천이 굳기 전에 시험관 윗부분에 1㎝ 높이의 깨끗한 받침대를 놓아주고 시험관을 옆으로 눕혀주며, 2～4시간 한천이 굳으면 동충하초균을 이식하여 원균인 균주로 이용한다.
(6) Massive cultivation method for isolates
(i) Cultivation of original fungi
In Entomopathogenic Fungal Culture Collection (EFCC), Kangwon National University, Korea, isolates are sub-cultured every 3~6 months to stabilize and vitalize the spawn, and are kept under the low temperature condition of 4~10°C. Proliferation of original fungi is performed on Petri dishes.
A variety of test tubes ranging from 75~200 × 10~25 mm are used for cultivating and preserving the original isolates. Usually, the test tube of 180 × 18 mm size is used for proliferating and preserving fungal isolates. The tube lid enables the fungi to live and grow well by preventing other fungi into the tubes and at the same time by allowing ventilation through it. Most lids are made of cotton but it demands a lot of time and labor so that silicon caps or screw capped test tubes are preferable nowadays.
Potato dextrose agar, malt yeast agar, and SDAY (Sabouraud dextrose agar plus yeast extract) are used as the nourishing agar for proliferating and keeping the original isolate. To prepare the test tube medium, the test tubes need first to be filled up to ¼ with totally melted dextrose agar. At this time, the agar can be adhered on the rim and contaminated by other fungi through the lid. Thus, it needs to be carefully dropped by connecting the small glass straw to the funnel. The test tube with the agar needs to be plugged with cotton or silicon tube and inserted into test tube box and then autoclaved inside high pressure sterilizer at 121°C at 15 psi (1.1 kg/cm2) for 20 min. After the sterilization is fully finished, the pressure needs to be lowered naturally, then the tube needs to be taken out and put it slanted position.
The reason why the tube is slanted is because when it is inoculated by the isolate, the fungi might be infected with germs which live in the water that develops during agar solidification process. Also, the surface area of medium in test tube can be enlarged, which is necessary for aerobic fungi.
