느타리버섯균에 대한 액체종균 연구에 대한 요약

  느타리버섯 8품종의 균사생장은 25～30℃의 온도 범위와 5.5～6.5의 pH 범위에서 가장 우수하였다. 영양원의 선발시험에서 탄소원으로서는 황백당, 밀가루 및 옥수수가루가, 그리고 질소원으로서는 대두분이 공시균주의 균사생장이 가장 우수하였다. 농업적으로 이용성이 우수한 황백당 3%, 대두분0.3%, 인산칼륨 0.05%, 황산마그네슘 0.05%를 배지조성으로하는 농업용 액체배지를 선발하였다.

삼각플라스크 배양에서는 250㎖의 erlenmeyer flask에서 보다는 250㎖의 shake flask에서 직경 6㎜의 균사절편을 2개 접종하여 배양액량 100㎖에서 배양했을 때 공시균주의 균사체 생산이 우수하였다. 그리고 erlenmeyer flask에서 배양방법을 달리하여 느타리버섯의 균사를 배양하였을 때, 45°경사배양한 처리구에서 균사체 생산이 가장 우수하였으며, 길이 50㎜×직경 10㎜의 유리막대를 넣고 배양한 처리구에서는 균체량이 가장 적었지만 펄프형의 균사생육을 유도할 수 있었다.

삼각플라스크 배양된 균사체 현탁액을 병배양의 접종원으로하여 접종량을 조사한 결과 4% 접종한 처리구에서 균사체 생산이 가장 우수하였으며, 접종량 1%에 통기량을 달리하여 병배양한 결과 1.5vvm으로 배양한 처리구에서 균사체 생산이 가장 우수하였다. 그러나 본 연구에서는 병배양의 최적 조건으로 배양액량 8리터와 접종량 1%, 통기량 0.5vvm으로 25℃에서 5일간 배양하였다.

배양용기의 선발시험에서는 경화유리로 국내에서 생산된 배양병 중에서 높이/폭의 비율이 큰 배양액량 8리터의 유리병을 선발하였으며, 실리콘 마개에 구멍을 뚫고 스텐레스관을 끼운후 실리콘 튜브로 배양라인을 연결하여 사용하였다. 총 배양라인의 숫자는 3개로, 통기라인과 배양액 채취라인은 배양병 바닥까지 연결하였으며, 배양액 채취라인에 연결관(quick connector)을 연결하여 접종라인과 겸용하였고, 배기라인은 실리콘 마개의 바로 밑에 설치하여 배양액으로부터 멀리 위치하였다. 그리고 배양라인에는 공기제균을 위하여 필터를 연결하였다.

공기제균을 위해서 시판되고 있는 PVA fiter와 실험실에서 제작한 섬유충진필터를 사용하였으며, 병배지의 멸균은 1100리터 용량의 살균솥에서, 121℃, 1.2㎏/㎠에서 60분 동안 실시하였다. 대량배양을 하고자 한다면 시판 필터보다는 자가제작하여 사용할 수 있는 섬유충진필터가 가격면에서 유리하다. 압축공기는 무오일 컴푸레서(oilless compressor)를 사용하여 공급하였다.

액체종균의 생산공정은 사면배양된 원균을 페트리디쉬에서 7일 정도 배양한 다음 삼각플라스크에 접종하여 25℃, 120rpm으로 회전형 진탕배양기에서 5일 동안 배양하였다. 삼각플라스크 배양에서 펠렛형의 균사생육이 아닌 펄프형의 균사생육을 얻고자하는 경우에는 균질기(homogenizer)로 균사절편을 분쇄하여 배양하는 것보다는 유리막대를 삼각플라스크에 넣고 배양하는 것이 무균조작과 균사의 활력유지면에서 유리하였다. 삼각플라스크 배양된 접종원을 8리터의 액체종균 배양병에 접종량 1%로하여 25℃에서 통기량 0.5vvm으로 5일 동안 배양하였다. 배양중에 발생하는 거품의 제거를 위해서 소포제로 식물성 기름을 살균전에 배지에 첨가하여 거품발생을 방지하였다.

액체종균의 병배양에서 잡균의 존재유무를 확인하는 방법으로는 배양액의 탁도변화와 배기되는 공기의 냄새로서 검사하는 관능검사방법과, YMA배지와 톱밥배지에서 배양하여 검사하는 두 가지 방법을 병용하였다.